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李記生物細胞轉染試劑常見(jiàn)問(wèn)題(一)

更新時(shí)間:2022-11-07      點(diǎn)擊次數:1738

涉及產(chǎn)品

  1. EZ Trans Plus細胞轉染試劑(Ⅱ) 貨號:AC04L011

  2. EZ Trans細胞轉染試劑(高效)  貨號:AC04L091/AC04L092

  3. EZ Trans細胞轉染試劑(低毒)  貨號:AC04L098/AC04L099

其他轉染產(chǎn)品

  1. EZ Trans Pro細胞轉染試劑(GMP) 貨號:AC04L032/AC04L033/AC04L034

  2. EZ Trans RNA轉染試劑       貨號:AC04L051

李記生物細胞轉染試劑常見(jiàn)問(wèn)題(一)

Q1:李記有3款轉染試劑,這3款有什么區別?和Li**對比效果如何?

A1:我司自行測試與收集客戶(hù)反饋數據,得到類(lèi)似結論:

  效率方面:EZ Trans Plus>Li**2000≈EZ Trans(高效)>Li** 3000>EZ Trans(低毒)

  毒性方面:EZ Trans(低毒)≈Li**3000<EZ Trans Plus<EZ Trans(高效)≈Li**2000

 

 

 

 

 

 


Q2:我們傳的細胞有抗生素,抗生素是絕對會(huì )影響轉染效率嗎?

A2:能不加盡量不加,理論上抗生素進(jìn)不到細胞內,但是在轉染試劑的作用下,細胞的通透性增加,抗生素可能進(jìn)到細胞內,對實(shí)驗結果完成影響。

 

 

 

 

 

 


Q3:protocol提到,要用Opti-MEM稀釋質(zhì)粒和轉染試劑。不能用1640稀釋么?另外質(zhì)粒和轉染試劑為什么要先稀釋然后再混合?不能把轉染試劑直接加到質(zhì)粒溶液中混合,然后再加培養基稀釋么?

A3:EZ Trans細胞轉染液屬于陽(yáng)離子類(lèi)型的轉染試劑,它與DNA形成復合物需要一定的條件,在合適的濃度下,有利于陽(yáng)離子包裹DNA形成良好形態(tài)的復合物進(jìn)入細胞。

  如果直接把兩者直接混合,兩者容易很快形成聚合物,聚集相態(tài)多樣,有可能使DNA暴露在表面,不容易進(jìn)入細胞,進(jìn)而降低轉染效率。所以EZ Trans和DNA的混合順序也很重要。

  培養細胞大多會(huì )用到胎牛血清,血清成分復雜,沒(méi)有人能說(shuō)清成分及含量。細胞轉染液成分比較明確,但是不能確定是會(huì )不會(huì )與胎牛血清的不明成分結合,事實(shí)上這種現象在大多數轉染試劑中都會(huì )造成不良影響,所以在形成EZ Trans-DNA復合物過(guò)程中要避免血清的影響。

 

 

 

 

 

 

 


Q4:protocol提到,“24-48小時(shí)內檢測轉染效率"指的是去除含復合物的培養液換成含血清的培養基之后的24-48h,還是指加入復合物后轉染24-48h?

A4:所有時(shí)間都是從EZ Trans-DNA復合物與細胞接觸開(kāi)始算。

 

 

 

 

 


 

Q5:我就是問(wèn)的體內直接轉染小鼠。你們現有的protocol是體外實(shí)驗的方法?

A5:體內直接轉染目前最多的是腺病毒,慢病毒,腺相關(guān)病毒。轉染試劑直接在體內用的報道我們目前沒(méi)有聽(tīng)過(guò)?,F有的做法是細胞在體外培養,轉染篩選后再打入體內。


文中涉及的生物試劑產(chǎn)品都為上海李記生物科技有限公司提供,還有WB技術(shù)服務(wù)等竭誠為您服務(wù)

 

 

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