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LyGreen (20×in water) HRM染料（20×水溶液）

產(chǎn)品描述

LyGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結合飽和熒光染料，是新一代用于HRM分析的熒光染料，也可用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）。該染料結構上由兩個(gè)單體染料分子通過(guò)一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體，在沒(méi)有DNA存在時(shí)，該結構呈無(wú)熒光環(huán)狀結構，一旦有DNA出現，則恢復隨機形態(tài)并與DNA結合發(fā)出強烈的綠色熒光。

與市場(chǎng)上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，LyGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn)：1）高靈敏度：在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強的信號。2）準確：結合雙鏈DNA，變形時(shí)染料不遷移，熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況；過(guò)量染料形成二聚體，而不游離，使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I，因此，使用LyGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗可以使用快速PCR步驟。3）高穩定性：在正常的儲存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì )被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復凍融。4）安全性好：細胞膜穿透性測試表明，LyGreen幾乎不能穿透細胞膜，安全性高。5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不許改變光譜元件設置，也無(wú)需改變操作步驟，qPCR完成后，無(wú)需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統下觀(guān)察分析。6）重復性好（如圖1.）：特殊設計染料，相同反應體系下，熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關(guān)，線(xiàn)性。

此外，LyGreen在做HRM分析時(shí)，相同反應條件下，熒光信號穩定而持久，重現性好。在微流PCR，恒溫擴增，毛細管電泳，DNA定量以及細胞活力鑒定等領(lǐng)域也具有的表現。本品以20×LyGreen水溶液形式提供（CAT#: D1003L5000 或D1003L5001）。另外，我公司也提供LyGreen HRM分析試劑盒（CAT#: D1101L1130），僅需添加引物和模板，可以體現LyGreen染料優(yōu)點(diǎn)。

應用實(shí)例

圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.

HRM分析設備為L(cháng)ightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)

運輸與保存方法

冰袋運輸。4 ºC干燥避光保存，保質(zhì)期12個(gè)月。

注意事項

1）做qPCR時(shí)注意設置陽(yáng)性和陰性對照。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

 光學(xué)性質(zhì)

激發(fā)波長(cháng)= 497 nm

發(fā)射波長(cháng)= 520nm

 實(shí)驗方法

PCR反應的配制（50uL）

注意事項

1)  請根據不同的儀器類(lèi)型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據所使用的Taq酶的不同進(jìn)行適當優(yōu)化；

2）根據實(shí)驗用量于冰上向無(wú)菌離心管中依次加入水，Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應體系（1×Master mix）；

3）將1×Master mix 適量分裝至無(wú)菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應)；

4）按照儀器類(lèi)型選擇合適的擴增程序。