高保真DNA聚合酶除具有對引物，末端不配對堿基進(jìn)行錯配修復功能外 ,對遠離，末端至數個(gè)堿基位點(diǎn)的錯配堿基也能進(jìn)行錯配修復?；卮鹩嘘P(guān)非末端不配對堿基對上述聚合反應“關(guān)”系統的影響 ,對深入認識高保真酶的保真機制和開(kāi)發(fā)此“關(guān)”系統的相關(guān)技術(shù) ,具有一定的理論和應用價(jià)值。我們采用非末端不配對的硫化修飾引物 ,研究其對不同保真度 DNA聚合酶引物延伸反應的影響 ,以觀(guān)察非末端的錯配堿基能否“關(guān)”閉高保真 DNA聚合酶介導的聚合反應。具有外切酶活性的高保真酶的這一維持高保真度的新機制 ,已被不同設計方案的實(shí)驗所證實(shí) ,包括應用遠離三末端的不配對堿基的引物及三末端耐外切酶的引物。這一新的“關(guān)”的機制 ,不但更新和完善了高保真聚合酶的工作原理 ,更為重要的是 ,這一“關(guān)”的效應在與耐外切酶消化的硫化磷酸修飾的堿基特異性引物聯(lián)合時(shí) ,構成了一種對SNP具有高度辨認能力的復合分子開(kāi)關(guān)系統。

    高保真DNA聚合酶是細胞復制DNA的重要作用酶，以DNA為復制模板，從將DNA由5'端點(diǎn)開(kāi)始復制到3'端的酶。高保真DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具備模板、 引物、dNTP 等的情況下）及其相輔的活性。在引物RNA'-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個(gè)將核苷酸。酶的專(zhuān)一性主要表現為新進(jìn)入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時(shí)才有催化作用?？赡苁姑傅臉嬒蟀l(fā)生變化，促進(jìn)3'-OH與5'-PO4結合生成 磷酸二酯鍵。若是錯誤的核苷酸進(jìn)入結合位點(diǎn)，則不能與模板配對，無(wú)法改變酶的構象而被3'-5'外切酶活性位點(diǎn)所識別并切除之。